Identificación de posibles factores de Myzus persicae implicados en la transmisión del virus del grabado del tabaco (TEV) y estrategias para interferir su expresión

摘要: En esta tesis se aborda la identificacion de factores del pulgon Myzus persicae que podrian participar en el proceso transmision potyvirus grabado tabaco, Tobacco etch virus (TEV), y explora the posibilidad alterar expresion genes particulares insecto vector como una manera dificultar o impedir diseminacion este virus. Se conoce intervencion un factor auxiliar origen viral, proteina HCPro, potyvirus, actuando puente molecular reversible para retener las particulas aparato bucal pulgon. La HCPro interacciona con capside CP, previsiblemente receptores especificos Despues analizar conjunto productos capaces interaccionar TEV (interactoma), han considerado dos proteinas candidatas. primera, MpRPS2, presenta homologia ribosomales, segunda MpRR1Cp2 es cuticular. interaccion entre MpRPS2 ha verificado ensayos Far Western Blot sistema doble hibrido levaduras. Los intentos confirmar localizacion estiletes diseccionados no fueron concluyentes, aunque antisuero especifico si podido detectar presencia cuticula mudas aisladas. Para validar participacion estos hipoteticos explorado estrategias interferencia genica pulgones. Tras sus niveles durante a lo largo desarrollo, consideraron sistemas inducir respuestas silenciamiento (RNAi) basados alimentacion. El uso dietas artificiales suplementadas dobles cadenas RNA especificas sintetizadas in vitro produjo general reducciones acumulacion mensajeros, mientras alimentacion pulgones sobre plantas infectadas viral basado cascabeleo rattle (TRV), contiene fragmento secuencia gen, tuvo efecto mas pronunciado. Las observadas variables los genes, fuerte caso gen alimentados tabaco variante TRV incorporaba gen. Este RNAi nos permitido ensayar reduccion candidatos seleccionados experimentos TEV. Estos resultados ayudar mejorar comprension interacciones moleculares necesarias transmision, identificar participan proceso, eventualmente usarse diseno innovadoras bloqueo basadas dichos factores. SUMMARY This thesis addresses identification of aphid factors that could be involved transmission process and explores possibility altering expression specific insect as way to prevent spread. An auxiliary origin, protein is known participate transmission. acts bridge retaining particles mouthparts. interacts with coat protein, predictably receptors After analyzing set products able interact (interactome), we have considered two candidate proteins. The first one shows homology ribosomal proteins, second one, cuticular protein. interaction between has been verified assays yeast two-hybrids. Attempts confirm localization this dissected stylets were not conclusive, although using an antiserum it possible detect presence cuticle isolated moults. To involvement these hypothetical process, strategies interference explored aphids. their levels along development, systems based on feeding induce silencing responses (RNAi). use artificial diets supplemented synthesized dsRNA did produced reductions mRNA accumulation, while aphids fed plants infected which contains fragment targeted showed more clear effects. observed rather variable considered, stronger effect case tobacco variant incorporates gene. system allowed us test knocking down selected candidates experiments. Our results might help improve our understanding interactions during transmission, identify eventually serve design new interfere dissemination specifically interfering expression.