Variación epigenética y expresión del par de genes w y CG32795 en distintas cepas mutantes zeste(1) de Drosophila melanogaster

摘要: El presente trabajo de tesis estudia diferentes mutantes zeste1 y el efecto que esta mutacion tiene sobre la regulacion transcripcion en diversos genes. En primer lugar se estudiaron los machos las cepas M115 RM115 cuya caracteristica principal, ademas ser portadores z1, es insercion un elemento FB-NOF tercer intron del gen CG32795, forma con white par genes head-to-tail. Para estudiar entorno fue necesario caracterizar a nivel secuencia mRNA prediccion posible funcion proteina codificada. Se encontraron diversas variantes splicing, tanto para su extremo 5 como 3, parecidas pero predichas anteriormente. Conociendo mas profundidad este gen, nos propusimos posibles efectos respecto expresion w CG32795. Los resultados llevaron estudio detallado partes cuerpo, teniendo cuenta especificidad tejido interaccion zeste-white presenta. Asi, demostramos no ve afectado por 3 diferencias observadas son debidas duplicacion Zeste Binding Site z1. Sin embargo, CG32795 si modifica gen. La solo responsable alteracion sino tambien reordenacion produce cepa eliminando copia original dejando duplico M115. La segunda parte hembras Analizamos dos ZBS (w dpp) observamos reduce dichos Ademas, estudiando constatamos local, sin afectar aunque encuentra tan 700bp w. reduccion podria debida alteraciones estructura cromatina, puesto agregados responsables reclutar complejo remodelador cromatina BRM, facilitando asi transcripcion. Mediante ensayo nucleasa micrococal detectamos algunas modificaciones posicionamiento nucleosomas dpp, siendo z1 estricto. Si BRM estas diferencias, patrones metilacion podrian verse alterados, pues muchos factores asociados complejos SWI/SNF han relacionado actividades mediante modificacion mismos. DNA bisulfito sodico estudiamos cinco regiones. Sorprendentemente, regiones proximas ellos, encontraban hipometilados desconocimiento general D. melanogaster hizo plantear cuales pueden secuencias diana especie. Asi realizamos estadistico bases anteriores posteriores Cs metiladas nuestras secuencias. obtuvieron frecuencias cada posicion establecio frecuente metilada ApDp5mCpDpD. Aun asi, una muy degenerada, hacen necesarios estudios profundos amplios confirmarla. The present PhD thesis studies several mutants and this mutation effect over the transcriptional regulation of some genes. The first part is based on study males strains, mainly characterized by insertion element in third gene, known to form head-to-tail gene pair with white. To background firstly we need characterize its sequence codified protein predicted structure function. Several splicing variants were found, not only for end but also 3end, similar different from ones been previously. Once obtained information proceeded effects expression. The results lead us deeper expression body segments, taking into account interaction tissue specificity. Thus, proved that affected downstream end. differences observed levels due duplication background. On contrary, does modify expression, mediates reordenation produced strain being responsible copy lost leaving alone duplicated strain. The second female mutants. We analyzed two possessing dpp). showed an reduction both females. Moreover, through having any even though located at Knowing aggregates recruit chromatin remodelling complex facilitating thus transcription, thought might occur alterations. A nuclease assay was performed modifications nucleosome positioning found dpp ZBS, females stricter. Were those differences, methylation patterns be changed, since many associated factors have related duties modification. bisulphite modification performed, studying pattern five regions. Surprisingly, regions surrounding them hypomethylated little available about encouraged sites specie. Our sequences statistically including before after methylated cytosine. each nucleotide frequency position. preferently consensus sequence: However, it much degenerated broader are required confirm it.