A multiplex PCR assay that separates Rhodnius prolixus from members of the Rhodnius robustus cryptic species complex (Hemiptera: Reduviidae).

摘要: Summary Rhodnius prolixus is one of the most important primary vectors human Chagas disease in Latin America. Its morphology is, however, identical to that members Rhodnius robustus cryptic species complex, which includes secondary vectors. The correct identification these taxa with differential vector competence therefore, great epidemiological relevance. We used alignment 26 mitochondrial cytochrome b haplotypes (663 bp) select for PCR-amplifiable species-specific regions. designed forward primer on a region conserved across all haplotypes, and three reverse primers anneal regions amplify fragments different lengths R. (285 bp) two major lineages: group I (349 bp) groups II–IV (239 bp). These were easily identifiable regular 1.5% agarose gels. This multiplex PCR assay was successfully tested 81 specimens from six American countries, determine phylogeographic boundaries each species. It simple, objective, cost-effective assay. PCR-based nature makes it applicable any insect developmental stage, as well dried specimens, remains. should be particularly useful areas where representatives occur sympatry. Rhodnius est l'un des plus importants vecteurs primaires de la maladie humaine en Amerique latine. Sa morphologie cependant identique celle membres du complexe cryptique especes qui comprend secondaires. L'identification correcte ces par differentielle vecteur lors grande importance epidemiologique. Nous avons utilise l'alignement sequences (663 pb) afin selectionner specifiques l'espece, amplifiables PCR. concu une amorce directe sur conservee chez tous les et trois amorces inverses s'hybridant l'espece amplifiant differentes tailles pour (285 deux lignees principales robustus: groupe (349 groupes II IV (239 pb). Ces etaient facilement identifiables gel d'agarose classique 1,5%. Cette analyse ete examinee avec succes provenant pays latino-americains utilisee determiner limites phylogeographiques chacune especes. Il s'agit d'une objective rentable. Le fait d’etre basee rend n'importe quel stade developpement, aux seches ou meme restes d'insecte. devrait etre particulierement utile dans secteurs representants sevissent sympatrie. Rhodnius es uno los vectores primarios mas importantes enfermedad Latinoamerica. Su morfologia, sin embargo, identica otros miembros del complejo criptico especies R.robustus, que incluye secundarios. La identificacion correcta este taxon con competencia diferencial por lo tanto una gran relevancia epidemiologica. Hemos utilizado alineacion haplotipos citocromo mitocondrial (663pb) para seleccionar regiones especie especificas amplificables Disenamos un cebador directo conservada todos haplotipos, y tres cebadores reversos anidaban especie-especificas amplificaban fragmentos diferentes tamanos (285pb) dos linajes grupo (349pb) grupos II-IV (239pb). Estos eran facilmente identificables geles agarosa al 1.5%. Este ensayo fue exito especimenes seis paises Latinoamericanos, asi como determinar las fronteras filogeograficas cada especie. Se trata prueba objetiva costoefectiva. naturaleza ensayo, basado PCR, convierte aplicable cualquier estado desarrollo insecto, secos e incluso restos insectos. Seria particularmente util representantes esta estan simpatria. Utilizamos mediante