Charakterisierung von Allergenen der Litchi

摘要: Ziel dieser Arbeit war die Charakterisierung des Allergenspektrums der Litchi sowie Isolierung und Identifizierung ausgewahlter Allergene. Auserdem sollte Stabilitat einzelner Litchiallergene gegenuber einer in-vitro Verdauung untersucht werden. Die erfolgte mittels Immunoblot nach vorangestellter Natriumlaurylsulfat-Polyacrylamid-Gelelektrophorese, Isoelektrischer Fokussierung zweidimensionaler Elektrophorese unter Verwendung von 39 Patientenseren. Mehr als Halfte Seren detektierte Allergene mit Molekulargewichten 28, 35, 40, 43, 55 70 kDa. Sie sind somit potenzielle Hauptallergene Frucht. Besonders das kDa Allergen, dass 92 % detektiert wurde, ist groser Bedeutung. werden 14, 25, 32, 60, 65 im Bereich nachgewiesen. Auffallig ist, Mehrheit einen isoelektrischen Punkt sauren zwischen ca. 4.0 5.2 aufweist. Des Weiteren geklart werden, ob in Glycoproteine vorliegen diese an IgE-Bindungsfahigkeit beteiligt sind. Im elektrophoretisch getrennten Proteinextrakt wurden Spaltung Periodat dem Schiffschen Reagenz Als Zuckerreste liegen alpha-D-Mannose oder alpha-D-Glucose, alpha-L-Fucose N-Acetylglucosamin nicht aber D-Galactose vor. Diese Reste konnten durch Bindung Lectine entsprechender Spezifitat Lectinblot nachgewiesen werden. Weiterhin Periodatbehandlung auf Nitrocellulose-Membran immungefarbt. Die Untersuchungen fuhren zu Ergebnis, eine Beteiligung Kohlenhydratreste Antikorperbindung einiger Molekulargewichtsbereich 43 moglich ist. Auserdem konnte kreuzreaktive Profilin Trennung Ionenaustauschchromatographie zwei Isoformen Punkten 4.3 3.9 Kein anderes Allergen tragt Epitope Profilins, was Immunoblot-Inhibitionsversuche Profilins den anderen Litchiallergenen Gelpermeationschromatographie gezeigt konnte. Fur verschiedene chromatographische Methoden fraktionierte Fallung eingesetzt. Ammoniumsulfatfallung, Gelpermeations-, Affinitats-, Ionenaustausch- Umkehrphasenchromatographie ihre Eignung, vorliegende Gemisch aufzutrennen, untersucht. Es zeigte sich, Hilfe Anionenaustauschchromatographie besten Ergebnisse erzielt konnen. standen vorangegangener Aufreinigung fur weitere wie zur Verfugung. Fur Mit Ausnahme zeigten alle bzw. deren Spaltprodukte Magenverdauung allergenes Potenzial. Dabei lag lediglich intaktes Molekul Alle kleine Fragmente gespalten. Darmverdauung resultierte aller nativen Trotzdem allen Verdauungsschritten Potenzial 28 32 gelang N-terminalen Sequenzierung. Identitat Allergens wurde zusatzlich Bestimmung Peptide Mass Fingerprint bestatigt. Das dessen Sequenz aufgrund Blockierung Edman-Abbau bestimmt konnte, einem MALDI-TOF/TOF tryptischem Verdau vermessen. Auf Weise sequenziert ermoglichten. Die N-terminale 25 hohe Ubereinstimmung NtPRp27-like Protein Kartoffel liegt Form drei Isoallergenen 7.37, 7.04 7.01 Dieses Literatur noch genannt. Auch Frucht (pI: 7.37 7.01). zeigt grose Homologie Triosephosphat-Isomerasen verschiedener pflanzlicher Herkunft. bereits Weizen Latex identifiziert. Das auffallige Chinon-Reduktase-Homolog, beschrieben wurde. Das identifizierte weist starke Methioninsynthasen Pflanzen auf. Eine Methioninsynthase Zusammenhang Allergien gegen Raps beschrieben. Aim of this study the characterisation allergen spectrum lychee as well isolation and identification some these allergens. Additionally stability allergens during digestion investigated. The characterised by immuno blot after sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel electrophoresis, isoelectric focussing two dimensional electrophoresis using sera patients suffering from allergy. Due to fact that more than 50 detected with molecular weights are potential main fruit. Especially is very important it sera. >70 were evidenced. Noticable majority has acidic point between 5.2. Furthermore occurrence glycoproteins their contribution IgE-binding investigated. For purpose different methods applied. In electrophoretically separated protein extract a multitude Schiff‘s reagent which based on decomposition periodate. Residues form alpha-D-mannose or alpha-D-glucose, alpha-L-fucose n-acetylglucosamin, but not D-galactose found. These carbohydrates proven means lectin suitable lectins. Moreover cross-reactive profilin evidenced purification ion exchange chromatography isoforms points 3.9. No other shows epitopes immunoblot inhibition separation permeation chromatography. For chromatographic fractionated precipitation utilised. The ammoniumsulfate precipitation, chromatography, affinity reversed phase tested for suitability separate complex mixture. anion showed best results. purified used further investigation. For used. After gastric all generated peptides allergenic potentcy, only did not. persistent digestion, decomposed into smaller fragments. intestinal fragmented, though steps potentcy still present. The achieved N-terminal sequencing. identity confirmed peptide mass fingerprint. could be investigated Edman degradation because blocking N-terminus. reason analysed tryptic gel. Thus sequenced made possible. The sequence high similarity potato three isoallergens found lychee. This mentioned content allergy literature so far. The also 7.01. A homology triose phosphate isomerases several plant origins determined. already identified wheat latex. The noticeable quinone reductase homolog been described until now. The methionine synthases various plants. regard allergies against rape.