Dévelappement de vecteurs lentiviraux non-intergratifs en vue du transfert de gènes dans le système nerveux central.

摘要: Les vecteurs lentiviraux sont parmi les plus efficaces et aises a manipuler en vue du transfert de genes. Leur application est toutefois fortement compromise par le risque mutagenese qui resulte l'integration leur genome dans la chromatine cellule cible. Plusieurs strategies peuvent etre envisagees afin contourner ce risque, l'une d'entre elle bloquer vecteur d'utiliser des sous forme episomale. Nous avons introduit une mutation region C-terminale l'itegrase derives HIV (262RRK->AAH). demontre que ces permettent l'expression d'un transgene differentes lignees cellulaires in vitro ainsi cultures primaires cellules arret division (astrocytes neurones). L'expression perdue dilution genomes non integres au cours cellulaire. Elle contraire stable division. egalement evalue l'activite residuelle d'integration mutants exprimant gene resistance G418 (NEO), reduite 2 3 log rapport controle. Enfin, nous capacite non-integratifs diriger vivo systeme nerveux central rongeur, pendant moins 10 semaines apres injection striatum souris 5 mois sous-retinienne chez rat. ensuite entrepris l'amelioration l'efficacite d'expression reduction d'integration. En premier lieu, but d'augmenter transcriptionnelle formes episomales lentiviral, incorpore sequences d'attachement matrice nucleaire (sequence MAR chaine legere l'immunoglobuline sequence lysozyme poulet). transduit progeniteurs neuraux humains avec permettant Luciferase. n'avons pas observe d'amelioration significative niveau presence MAR. Parallelement, produit portant mutations l'integrase (N : 262RRK↑AAH, ou LQ 186K↑Q, 214Q↑L, 216Q↑L, 64D↑V) differents transgenes (GFP, LUC, GDNF). compare transduction vecteurs. etabli N efficace D64V LQ. effet un phenomene saturation N. expression comparable transgene. NEO d'integrase, seules combinaison modification LTR. frequence presente elevee mutants. La 1 controle integratif tandis qu'elle pour Par ailleurs, LTR, soit mutee consideree.