Bacterial ghosts as carrier of Her-2/neu subunit vaccines

摘要: Her-2/neu (human epidermal growth factor receptor 2) steht als Onkogen im Mittelpunkt vieler Bestrebungen ein therapeutisches Mittel gegen Brustkrebs zu entwickeln. Als Mitglied der Familie epidermalen Wachstumsfaktorrezeptoren (EGFR) ist es in 30% Brust-und Prostatakarzinomen uberexprimiert und mit einem progressiven Verlauf Krankheit einer hohen Ruckfallquote verbunden. Teilstrukturen dieses Oberflachenrezeptors zeigten Immunisierungsstudien an Mausen bereits Induktion von anti Antikorper, die eine Inhibition des Tumorwachstums zur Folge hatte. Ziel dieser Arbeit war Bacterial Ghost Platform Technology Delivery System einzusetzen. Dafur sollten Peptidsequenzen P4, P6 P7- lineare Epitope gekoppelt Multiepitop p467, ebenso wie das Konformationsepitop, Herzeptin Mimotop (hm), den Vektor pMal-p2x kloniert E. coli transformiert werden. Der resultierende (pMal-467, pMal-hm) erzeugt durch IPTG-Induktion Maltose-Bindeprotein (MBP) Fusion dem Peptid (MBP-467, MBP-hm) Signalsequenz MBP leitet Fusionsprotein Periplasma Bakteriums. Das sollte vor allem uber Schwefelbrucken zirkularisierten oxydative Umgebung gute Voraussetzungen bieten, um vorgesehene Konformation, ja nur solche immunogen ist, einzunehmen. Zur Produktion Ghosts (BGs) wird Expression Fusionsproteinen nachgeschalteter Protein E vermittelter Lyse durchgefuhrt. Resultat nicht lebensfahige Bakterienhulle, deren periplasmatischer Raum gefullt ist. Diese Tumorantigenen bestuckten BGs sind Vakzin konzipiert, aktive Immunisierung praventive Langzeitimmunitat Brutkrebs erzeugen soll. In Vorversuchen wurde erfolgreiche Fusionsproteins MBP-467 p467 spezifischen Antiseren mittels Western Blot Analyse nachgewiesen Lyseeffizienz 99.9% erreicht. Daraufhin wurden NM522 (pGLysivb, pMal-467) 20l Fermenter produziert fertige Produkt Immunisierungstudie Balb-c getestet. Es konnte peptidspezifischer Antikorper Vorversuche fur zyklische verliefen Rahmen erfolgreich. DNA Sequenzierung klonierten Vektors pMal-hm zeigte zwar, dass korrekten Leserahmen somit werden sollte, aber eindeutiger Nachweis Trastuzumab (Handelsname Herzeptin) gelang nicht. MBP-Teil vermutlich uberwiegend Abbauprodukt Fusionsproteins, bei einzelnen Klonen schwache Bande erwartende Peptidgrose sichtbar. Ausmas Expression, Transports Faltung Proteins also entweder einen gering, oder instabil abgebaut.