Die Amyloidablagerung in einem Mausmodell der Alzheimer Demenz und die Modulation der β-Amyloid-Peptidentstehung durch membranverankerte Inhibitoren

摘要: Die genaue Pathogenese der Alzheimer Demenz ist noch ungeklart, doch wird angenommen, dass die Aggregation und Akkumulation von bestimmten Formen des Aβ-Peptides den Ausloser fur nachfolgenden pathologischen Mechanismen bildet. Als experimentelle Modelle charakteristische Amyloidpathologie Untersuchung moglichen auf β-Amyloid (Aβ)abzielenden Therapieansatzen, werden haufig transgene Mause eingesetzt, mutierte Varianten Amyloid-Vorlaufer-Proteins (APP) exprimieren. In einem ersten Teilprojekt dieser Arbeit sollte altersabhangige APP23 Mause, humanes APP mit schwedischen Mutation exprimieren, biochemisch untersucht humanen Proben verglichen werden. Ein Schwerpunkt dabei Analyse verschiedener Modifikationen gelten. In Mausen, wurde ein exponentieller zeitlicher Verlauf Aβ-Akkumulation beobachtet, im Einklang steht „Keim-Theorie“ amyloidogenen Proteinen. Es zeigten sich grundlegende Unterschiede in Zusammensetzung amyloiden Ablagerungen zwischen Maus Mensch. Wahrend beim Menschen hautpsachlich Aβ42 abgelagert wurde, war Hauptmenge bei das am C-Terminus um zwei Aminosaurereste kurzere Aβ40. Des Weiteren enthielten Plaques verschiedene N-terminal trunkierte Aβ Variationen, denen eine Aβ-Form, an Position 3 Pyroglutamat beginnt, darstellte. Diese konnten auch Mausen nachgewiesen werden, jedoch weitaus geringeren Mengen als Menschen. Dies verdeutlicht, humane nur unvollstandig abbilden. Aufgrund biophysikalischen Eigenschaften hydrophoben, zur neigenden ergaben methodische Schwierigkeiten. Deshalb Extraktionsmethode, Extraktion Aymloidproteinen peripheren Amyloidosen entwickelt modifiziert erstmals Gewebextraktion angewendet. Dadurch gelang es, Amlyoid aus dem Gewebe Reinstwasser zu losen fibrillare Struktur Elektronenmikroskop darzustellen. Kontaminationsproblemen 2DE durch adhasive Aβ-Peptide, wurden Entwicklung eines mehrstufigen Reinigungsprotokolls, Behandlung Proteinase K einschliest, begegnet. zweiten sollten primaren neuronalen Zellen Zelllinien membranverankerte BACE Inhibitoren verschiedenen Pharmakophoren, unterschiedlichen Linkerlangen Variationen Lipid-Ankern charakterisiert hauptsachliche β-Sekretase, enzymatische Aktivitat, Schritt Aβ-Generierung katalysiert. Der mittels Dihydrocholesterol 89 A Linker Membran verankerte Inhibitor allen Zellmodellen effektiver entsprechende freie Reduktion Menge sezernierten Aβ-Peptiden. zeigte sich, Inhibitoren, einen Anker enthielten, vornehmlich „Lipid Raft“ inserierte, waren andere, weniger oder nicht „raftophile“ Lipid-Anker. Zusatzlich konnte Anpassung Abstandes Inhibitors Membran, weiter optimiert Interessanterweise hatten unterschiedliche Effekte Wild-Typ Doppelmutation, direkt vor β-Sekretase Schnittstelle befindet. Auch entstanden Gegenwart BACE-Inhibitoren geringe Aβ-Peptiden, moglicherweise modifizierte N-Termini aufwiesen APPsw transfizierten detektiert wurden. Da / verkurzte Aβ-Peptide grosen Anteil ausmachen, deren Entstehung pathophysiologische Bedeutung haben.