Vergleichende Analyse der anti-Bcl-2 Antisense-Oligonukleotide SPC2996 und Oblimersen in präklinischen Modellen der chronischen lymphatischen Leukämie

摘要: Das antiapoptotische Protein „B-cell-lymphoma 2“ (Bcl-2) spielt eine bedeutende Rolle fur das Uberleben von Zellen der chronischen lymphatischen Leukamie (CLL) und konnte sich daher als Zielstruktur die Entwicklung neuer Therapieansatze eignen. In dieser Arbeit wurden mit Hilfe verschiedener praklinischer in vitro vivo CLL-Modelle pharmakologischen Effekte anti-Bcl-2 Antisense Oligonukleotide (AODN) Oblimersen SPC2996 unter Berucksichtigung ihrer unterschiedlichen chemischen raumlichen Struktur charakterisiert. Unter Verwendung MEC-1 Leukamiezelllinie gezeigt werden, dass ihre molekulare Bcl-2 sowohl auf mRNA- auch Proteinebene herunterregulieren konnen. Diese Ergebnisse konnten allerdings nicht primare CLL-Zellen, bei denen weder Regulation noch Beeinflussung des Zelluberlebens nachgewiesen werden konnte, ubertragen werden. Nach Aufnahme Zytoplasma war konfokalen Fluoreszenzmikroskopie endosomale Anreicherung fluorochrom¬markierter AODN zu beobachten. Uber Aktivierung endosomalen Toll-like-Rezeptor-9 (TLR-9) induzierten Reihe Nebeneffekten den CLL-Zellen. So zum Beispiel neben Ausschuttung proinflammatorisch wirksamen Zytokine MIP-1 alpha TNF-alpha Heraufregulation membranstandigen Aktivierungsmarker CD20 CD40 gesteigerte Adhasion CLL-Zellen an M2-10B4 Stromazellen Die vergleichende Analyse beider ergab, starkere Herunterregulation geringere TLR-9-vermittelte Nebeneffekte induzierte Oblimersen. Da Basensequenz beiden nur unwesentlich unterscheidet, ist pharmakologisch gunstigere Wirkprofil wahrscheinlich LNA-Modifikation zuruckzufuhren. Im CLL NOD/SCID („Non-obese diabetic/Severe combined immune deficiency“) Xenograft-Modell Ubereinstimmung klinischen Phase-1 Ergebnissen AODN-induzierte Umverteilung transplantierten leukamischen aus dem Blut Milz Knochenmark Empfangertiere